Hållbarhetsstudie på adrenokotrikotropt hormon (ACTH) i blodprov från häst

Summering av slutrapport

Analys av adrenokortikotropt hormon (ACTH) i plasma är en viktig del vid diagnostik av PPID (equine pituitary pars intermedia dysfunction), vilket är en sjukdom som drabbar många gamla hästar. I blodprov från människa bryts ACTH ned snabbt på grund av enzymer i blodet och eventuell hemolys. Syftet med studien var att undersöka hållbarheten av ACTH i blodprover från häst som förvarats i frys, kylskåp och i rumstemperatur, samt effekten av hemolys och olika provtagningsmaterial. ACTH-koncentrationen i EDTA-plasma från fem hästar visade godtagbar hållbarhet vid förvaring i kyl i upp till två dygn och som EDTA-plasma eller helblod i rumstemperatur i minst ett dygn. Hemolys i provet försämrade hållbarheten och ACTH-koncentrationerna var lägre i heparinplasma jämfört med EDTA-plasma. Denna studie visar att prover för analys av ACTH kan tas och transporteras i rumstemperatur i minst ett dygn, vilket möjliggör att ambulatoriska veterinärer kan använda ACTH för diagnostik av PPID.

Sammanfattning av ansökan

Analys av adrenokortikotropt hormon (ACTH) i plasma är en viktig del vid diagnostik av PPID (equine pituitary pars intermedia dysfunction), tidigare kallad Cushings syndrom, vilket är en vanlig sjukdom hos gamla hästar.

I blodprov från människa bryts ACTH snabbt ned på grund av proteolytiska enzymer i blodet och ev. hemolys. Det är oklart om ACTH är lika instabilt hos alla djurarter och hållbarhetsstudier på ACTH i plasma från häst har inte tidigare publicerats.

Syftet med studien är att undersöka hållbarheten av ACTH i blodprover från häst som förvarats i frys, kylskåp och i rumstemperatur. För närvarande måste blodprover snabbt centrifugeras efter provtagning för att sedan frysas och skickas nedfrysta till sjukhuslaboratorier eller veterinärmedicinska laboratorier utomlands för analys. En god hållbarhet av ACTH i blodprover från häst skulle förenkla transporten av prover, vilket skulle möjliggöra bättre diagnostik vid misstanke på PPID.

Populärvetenskaplig redovisning

Vanliga rutiner för blodprovstagning kan användas för att ställa diagnosen PPID hos häst

Denna studie visar att hållbarheten för adrenokortikotropt hormon, ACTH i EDTA-plasma och EDTA-helblod är mycket bättre än vad man tidigare trott. Prover kan tas, prepareras och förvaras i rumstemperatur i åtminstone ett dygn med godtagbar hållbarhet. Om proverna förvaras i kyl eller frys förbättras hållbarheten.

Equine pituitary pars intermedia dysfunction (PPID), tidigare kallat Cushings syndrom hos häst, är en sjukdom i intermediära hypofysen som drabbar många gamla hästar. Vid PPID ses förändringar i hypofysen som kan leda till ökad frisättning av adrenokortikotropt hormon (ACTH). ACTH är ett hypofyshormon som stimulerar ökad produktion av kortisol i binjuren. Ökad produktion av ACTH och kortisol leder till en mängd olika följdsymtom som t.ex. hirsutism (abnormal hårtillväxt), tillbakabildning av muskler, fång (inflammation i hovarna), opportunistiska infektioner och insulinresistens. Analys av ACTH-koncentration har visat sig vara ett enkelt och bra sätt att diagnostisera PPID. Analys av ACTH i blodprov från människa är problematisk då ACTH bryts ned av enzymer i både helblod och plasma. Studier på blod från människor har visat att den nedbrytande processen av ACTH går fort och att det därför är viktigt att provet förvaras på is och att analysen sker så snart som möjligt efter provtagningen. Tidigare har stabiliteten av ACTH i blod från hästar ansetts vara lika begränsad som i prov från människa men det har nyligen kommit några studier som talar för att ACTH i plasma från häst har bättre hållbarhet än man tidigare trott.

Det primära syftet med studien var att studera hållbarheten av ACTH i vanliga blodprov tagna från häst. Om blodproverna kan hanteras och förvaras i rumstemperatur fram till analys skulle det göra denna analys tillgänglig för alla veterinärer. Dessutom ville vi göra en basal utvärdering av metodens prestanda, samt undersöka hur hemolys (blodkropparna har gått sönder) och olika provtagningsmaterial påverkar ACTH-koncentrationen

Det visade sig att hållbarheten för ACTH i EDTA-plasma och helblod i fem prover som förvarats i rumstemperatur var godtagbar i ett dygn. Plasmaprover som förvarats i kyl var hållbara i två dygn. ACTH-koncentrationen blev lägre i blodprover tagna i blodprovsrör med heparin jämfört de som togs i blodprovsrör med EDTA. Hemolys innebär att de röda blodkropparna har gått sönder i provet. Måttlig till kraftig hemolys påverkade ACTH-resultaten med mer än ± 25 % vid analys direkt efter hemolystillsats och i prover med hemolys sågs sämre hållbarhet än i prover utan hemolys. Alla prover analyserades på Klinisk kemiska laboratoriet, Universitetsdjursjukhuset, SLU med hjälp av Immulite 2000 Immunoassay System (Siemens Healthcare Diagnostics).

Det är en stor fördel för veterinärmedicin att blodprover för att ställa diagnosen PPID kan tas under normala förhållanden i vanlig klinisk hästpraktik. Baserat på våra studier av prestanda för metoden och hållbarhet på ACTH, så analyseras numera ACTH på Klinisk kemiska laboratoriet, UDS, SLU. Analysen finns tillgänglig både för veterinärer inom SLU, men även för inskickade prover.